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多拷贝高效表达重组菌丝霉素的毕赤酵母

发布者:管理员 发布时间:2020-06-22 作者: 来源: 点击量:

       专利号:ZL201010291818.5
       专利名称:多拷贝高效表达重组菌丝霉素的毕赤酵母
       专利完成人;王建华  杨雅麟  张军  滕达  王少然
       专利简介: 本发明公开了一种多拷贝表达重组菌丝霉素的毕赤酵母的制备方法。该方法包括:根据毕赤酵母翻译的密码子偏爱性,设计出菌丝霉素表达基因的序列;将优化的菌丝霉素基因融合在表达载体pPICZαA的α-因子信号肽C端,构建单拷贝表达载体,该载体含有由起始信号元件醇氧脱氢酶强启动子(AOX)、α-因子信号肽基因及融合在其C端的菌丝霉素基因和终止信号元件AOX(TT)等组成的菌丝霉素表达盒;利用限制性内切酶BglII和BamHI粘性末端能互补的原则,通过反复酶切、连接和转化操作,获得含菌丝霉素基因的不同拷贝串联表达盒的重组质粒,电转化毕赤酵母后,在甲醇诱导下能高效分泌表达菌丝霉素,表达量与菌丝霉素基因拷贝数之间存在线性关系。本发明所构建的多拷贝高表达酵母细胞可用于提高产量、降低成本,适于菌丝霉素的规模化生产。


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